Resumen de la tesis que presenta Keily Naomi Del Aguila Velasco como requisito parcial para la obtención
del grado de Maestra en Ciencias en Ciencias de la Vida
Aislamiento y caracterización de un fragmento de anticuerpo vNAR neutralizante de PD-L1 como herramienta para la inmunoterapia de distintos tipos de cáncer
Resumen aprobado por:
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Dra. Olivia Cabanillas Bernal
Codirectora de tesis
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Dr. Alexei Fedorovish Licea Navarro
Codirector de tesis
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Resumen en español
El cáncer en una de las principales causas de muerte a nivel mundial y se caracteriza por un conjunto de
mutaciones que afectan el ciclo celular, ocasionando una división descontrolada de las células del
organismo. El sistema inmunológico tiene la capacidad de eliminar a las células cancerígenas por medio
de los linfocitos TCD8+, los cuales, una vez terminada su función efectora, detiene su respuesta por medio
de la proteína PD-L1 que se expresa principalmente en células presentadoras de antígeno (APCs). Sin
embargo, distintos tipos de cáncer han desarrollado la capacidad de expresar esta proteína ocasionando
la evasión de la respuesta inmunológica y su proliferación en el organismo. Como una alternativa a los
tratamientos actuales contra el cáncer se ha desarrollado el uso de inmunoterapia utilizando distintos
componentes del sistema inmunológico como los anticuerpos monoclonales. Otras herramientas
utilizadas han sido los anticuerpos de tiburón conocidos como IgNARs, los cuales se componen de una
estructura conocida como VNAR en donde se encuentra la región determinante de complementariedad
del anticuerpo, cuyas características como tamaño pequeño, estabilidad térmica, alta afinidad y el uso de
bibliotecas sintéticas para su obtención, han permitido su amplio uso en clínica. En este trabajo se aisló un
fragmento de anticuerpo de dominio sencillo de tiburón, VNAR, a partir de tres bibliotecas sintéticas y
mediante el uso de la técnica de despliegue de fagos se preseleccionaron ocho posibles candidatos con
reconocimiento por la proteína PD-L1. El mejor candidato al evaluar tanto la expresión y el reconocimiento
por el antígeno fue PDL1-07, el cual fue obtenido como proteína recombinante y se confirmó su capacidad
de reconocimiento en ensayos de citometría de flujo, en donde mostró capacidad de reconocer al blanco
terapéutico en la superficie de tres líneas celulares de cáncer, con diferentes niveles de expresión de PD-L1.
Palabras clave: Cáncer, PD-L1, VNAR, Inmunoterapia
Resumen en inglés
Cancer is one of the leading causes of death worldwide and is characterized by a set of mutations that
affect the cell cycle, causing uncontrolled cell division. The immune system can eliminate cancer cells
through TCD8+ lymphocytes, which, once their effector function is complete, halt the immune response via
the PD-L1 protein, primarily expressed on antigen-presenting cells (APCs). However, various types of
cancer have developed the ability to express this protein, leading to evasion of the immune response and
their proliferation within the organism. As an alternative to current cancer treatments, immunotherapy
has been developed, utilizing different components of the immune system such as monoclonal antibodies.
Other tools used have been shark antibodies known as IgNARs, which are composed of a structure known
as a VNAR where the antibody's complementarity-determining region is located. Their characteristics, such
as small size, thermal stability, high affinity, and the use of synthetic libraries for their production, have
allowed for their widespread use in clinical practice. In this work, a single-domain shark antibody fragment,
a VNAR, was isolated from three synthetic libraries, and eight potential candidates for recognition by the
PD-L1 protein were preselected using phage display techniques. The best candidate, based on both
expression and antigen recognition, was PDL1-07, which was obtained as a recombinant protein. Its
recognition capacity was confirmed in flow cytometry assays, where it demonstrated the ability to
recognize the therapeutic target on the surface of three cancer cell lines with different levels of PD-L1
expression.
Palabras clave: Cancer, PD-L1, VNAR, Immunotherapy