Diversas colecciones de microalgas y cianobacterias se han desarrollado debido a su creciente valor científico e industrial; sin embargo, su mantenimiento continuo es costoso y conlleva el riesgo de pérdida de cultivos. La criopreservación ofrece una alternativa eficaz para su conservación a largo plazo, al asegurar disponibilidad, estabilidad genética y una reducción significativa en los costos de mantenimiento. En este trabajo se evaluó el efecto de dos métodos de congelación sobre el crecimiento, tamaño celular y respuesta fisiológica de las microalgas Chaetoceros muelleri, Phaeodactylum tricornutum y la cianobacteria Synechococcus elongatus. Se comparó un método de congelación controlado (criocámara) y un método no controlado (caja de poliestireno y Cryo Rack), utilizando dimetilsulfóxido (DMSO) al 10 % como crioprotector. El crecimiento y el tamaño celular se analizaron a los 1, 7 y 14 días de almacenamiento, mientras que la viabilidad, definida como la capacidad de las células para mantener su integridad estructural y funcional, y la respuesta fisiológica (estrés oxidativo, apoptosis y proliferación) se evaluaron a los seis meses de almacenamiento mediante citometría de flujo para el método de congelación más eficiente. Después de 14 días de almacenamiento, el crecimiento de las especies estudiadas no mostró diferencias significativas (p > 0.05) entre los métodos de congelación. Tanto las diatomeas como la cianobacteria presentaron una reducción en longitud y ancho en ambos métodos. Dado que ambos métodos resultaron adecuados para la criopreservación a corto plazo, se optó por realizar los análisis de viabilidad y respuesta fisiológica con el método más económico, la caja de poliestireno. Con este método se obtuvieron viabilidades superiores al 70 % para S. elongatus y P. tricornutum, mientras que C. muelleri redujo su viabilidad a menos del 25 %. Las tres especies presentaron elevados niveles de estrés oxidativo inmediatamente después de la descongelación; sin embargo, los niveles de ROS disminuyeron drásticamente a las 24 h. Asimismo, todas las especies mostraron un aumento de la capacidad proliferativa a las 24 h. En este estudio, la citometría de flujo permitió evaluar el estado fisiológico de las células post-criopreservación, evidenciando alteraciones funcionales no detectables mediante métodos tradicionales basados únicamente en crecimiento o viabilidad.

Several collections of microalgae and cyanobacteria have been developed due to their increasing scientific and industrial value; however, their continuous maintenance is costly and entails the risk of culture loss. Cryopreservation offers an effective alternative for long-term conservation, ensuring availability, genetic stability, and significant reductions in maintenance costs. In this study, the effects of two freezing methods on growth, cell size, and physiological responses were evaluated in the microalgae Chaetoceros muelleri and Phaeodactylum tricornutum, and the cyanobacterium Synechococcus elongatus. A controlled freezing method (cryogenic chamber) and an uncontrolled method (polystyrene box and Cryo Rack) were compared, using 10 % dimethyl sulfoxide (DMSO) as a cryoprotectant. Growth and cell size were analyzed after 1, 7, and 14 days of storage, while viability, defined as the ability of cells to maintain their structural and functional integrity, and physiological response (oxidative stress, apoptosis, and proliferation) were evaluated after six months of storage by flow cytometry, for the freezing method that proved to be the most efficient. After 14 days of storage, microalgal growth showed no significant differences (p > 0.05) between freezing methods for any of the species. Both diatoms and the cyanobacterium showed reductions in cell length and width under both methods. Since both methods were suitable for short-term cryopreservation, viability and physiological response analyses were conducted using the most economical method, the polystyrene box. When this cryopreservation method was applied, viabilities greater than 70 % were observed for S. elongatus and P. tricornutum, whereas C. muelleri showed a reduction in viability to less than 25 %. All three species exhibited high levels of oxidative stress (ROS) immediately after thawing; however, ROS levels decreased drastically after 24 h. In addition, all species showed increased proliferative capacity at 24 h. In this study, flow cytometry enabled a comprehensive assessment of cell physiological status post-cryopreservation, revealing functional alterations that are not detectable by traditional methods based solely on growth or viability. These results support the usefulness of flow cytometry as a reliable tool for physiological evaluation in microalgal and cyanobacterial culture collections.